Cómo elegir un termociclador: guía del comprador de máquinas de PCR para laboratorios de investigación
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Los termocicladores son uno de los instrumentos más utilizados en los laboratorios de biología molecular. Con docenas de modelos disponibles de múltiples fabricantes, seleccionar la máquina de PCR adecuada requiere hacer coincidir las especificaciones del instrumento con los requisitos de su aplicación y el rendimiento. Esta guía cubre los puntos clave de decisión para los laboratorios que compran termocicladores nuevos o reacondicionados.
¿Qué es un termociclador?
Un termociclador, o máquina de PCR, controla con precisión la temperatura durante intervalos de tiempo definidos para impulsar los pasos de desnaturalización, anillamiento y extensión de la reacción en cadena de la polimerasa. Los termocicladores modernos utilizan elementos de calentamiento y enfriamiento basados en Peltier para lograr transiciones de temperatura rápidas y uniformes en un bloque de muestras.
Aplicaciones clave
La amplificación de PCR estándar para clonación y genotipificación es el caso de uso más común, pero los termocicladores también se utilizan para la detección de PCR en colonias, mutagénesis dirigida, síntesis de ADNc y transcripción inversa, y preparación de reacciones de secuenciación. Cada aplicación puede tener requisitos específicos para la velocidad de rampa, la uniformidad de la temperatura y el formato del bloque.
Formato de bloque: 96 pocillos frente a 384 pocillos
El bloque de 96 pocillos es el formato estándar para la mayoría de los laboratorios de investigación y es compatible con la más amplia gama de consumibles y reactivos. El bloque de 384 pocillos se utiliza en el cribado de alto rendimiento y en los flujos de trabajo de genómica donde el volumen de la muestra y la reducción del costo de los reactivos son prioridades. Algunos instrumentos ofrecen bloques dobles de 48 pocillos o sistemas de bloques intercambiables para mayor flexibilidad en las aplicaciones.
Capacidad de gradiente
Los termocicladores con gradiente permiten la prueba simultánea de múltiples temperaturas de anillamiento en todo el bloque en una sola ejecución. Esto es esencial para optimizar las condiciones de PCR para nuevos pares de cebadores y plantillas. Si su laboratorio desarrolla regularmente nuevos ensayos de PCR, la capacidad de gradiente es una característica de alto valor que reduce significativamente el tiempo de optimización.
Velocidad de rampa
La velocidad de rampa describe la rapidez con la que el bloque realiza la transición entre temperaturas. Las velocidades de rampa más rápidas reducen el tiempo total de ejecución, lo cual es importante en laboratorios de alto rendimiento que ejecutan muchos ciclos por día. Las velocidades de rampa estándar son de 2-3 °C por segundo; los instrumentos de alto rendimiento alcanzan los 5-6 °C por segundo. Para la mayoría de las aplicaciones de investigación, las velocidades de rampa estándar son suficientes.
Termocicladores nuevos frente a reacondicionados
Los termocicladores se encuentran entre los instrumentos más rentables para comprar reacondicionados. La tecnología central es madura y confiable, y las unidades bien mantenidas de Applied Biosystems, Bio-Rad y Eppendorf pueden proporcionar años de vida útil adicional. Las comprobaciones clave para los termocicladores reacondicionados incluyen la verificación de la uniformidad de la temperatura del bloque, la función de calentamiento de la tapa y el rendimiento de la velocidad de rampa.
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